Phòng cách ly áp lực âm có cấu tạo gồm hai phòng là phòng đệm và phòng chính. Không khí từ bên ngoài đi qua phòng đệm vào phòng chính và ra ngoài qua khu vệ sinh của bệnh nhân. Phòng được đóng pano tường, trang bị hệ thống kiểm soát áp suất và điều khiển nhiệt độ, bộ lọc Hepa, hệ thống dẫn khí, giúp duy trì áp suất âm từ phòng này sang phòng kia. Phòng cách ly được thiết kế hiện đại với hai lớp cửa. Khi cửa này mở thì cửa kia phải đóng, không thể mở cả hai cùng lúc. Từ bên ngoài, các bác sĩ có thể theo dõi bệnh nhân liên tục qua hệ thống camera.
Những căn phòng áp lực âm như thế này thường được xây dựng trong khu cách ly bệnh truyền nhiễm của bệnh viện, nhằm đảm bảo mầm bệnh không phát tán ra môi trường xung quanh. Phòng thường được sử dụng để cách ly các bệnh nhân lao, sởi, thủy đậu, cúm, SARS, Ebola và Covid-19. Nếu có một bệnh nhân nhiễm Covid-19 được cách ly trong phòng áp lực âm, các giọt bắn chứa virus của họ sẽ không thể nào lội ngược dòng không khí này để thoát ra bên ngoài cửa. Lúc này, hiện tượng lây nhiễm chéo qua dòng không khí giữa các bệnh nhân sẽ được dập tắt.
Không khí chỉ lưu thông một chiều, áp lực âm hút không khí vào bên trong rồi chạy ra ngoài qua màng lọc cực kỳ đặc biệt, lọc được cả virus rất nhỏ.
Bên trong phòng áp lực âm vẫn có nguy cơ nhiễm khuẩn nên người chăm sóc bệnh nhân phải mặc áo bảo hộ và đeo khẩu trang phòng bệnh. Phòng áp lực âm chỉ sử dụng trong điều trị những ca bệnh nặng, có nguy cơ lây nhiễm rất cao, luôn sáng đèn 24 giờ.